Aula Microbiologia 10/06

Aula prática laboratório

O que é Coloração de Gran?
é o método utilizado para colorir as bactérias e podermos visualizar no microscópio.

Pegar uma Lâmina limpa, sem nada e prepará-la para fazer o esfregaço.

O que é preciso para fazer o esfregaço?
Para o esfregaço é preciso de  2 corantes, lugol e álcool.

Material utilizado:

Meio de cultura caldo (substância que se prepara no laboratório para o crescimento da bactéria, é a "comida" dela, é um caldo nutriente).
Quando for sólido chamamos de meio ágar que é um estrato, uma gelatina retirada de algas.
Cristal de Genciana = serve para corar as bactérias de roxo.

Agulha de inoculação ( toda vez que utilizar esta agulha tem que flambar no bico de bulsem até ficar incandescente, todo vermelho.) Este procedimento serve para esterilizar). Após este processo, espera esfriar para poder pegar a bactéria e passar na lâmina, fazendo o esfregaço.

Swab = serve para pegar a bactéria que encontra-se na boca. Ao passar na lâmina, deve-se ter atenção para esfregar num sentido único. Feito isso, passar a lâmina já com a bactéria por 4 vezes no fogo para fixação da bactéria na lâmina, espere esfriar.

Fucsina = Corante primário
O próximo passo é pingar uma gota de Fucsina na Lâmina e esperar 1 minuto. Abra a torneira com um fio de água e lave a lâmina.

Lugol = Serve pra intensificar a cor da bactéria.
Depois aplique uma gota de lugol e aguarde mais 1 minuto. Este processo que estamos fazendo é para colorir, pintar as bactérias. Espere agir por 1 minuto e depois lave.

Álccol - Após 1 minuto depois de ter pingado o Lugol, lave a lâmina no fio de água, coloque na lâmina uma gota de álcool e espere 30 segundos, lave novamente e pingue uma gota de fucsina.

Fucsina = aplico uma gota de Fucsina depois de ter usado o álcool e espero agora por 1 minuto.
lavar a lâmina com um fio de água e deixar secar para usar no microscópio.

Utilizamos 2 corantes porque a bactéria pode ser Grans positiva e Grans negativas. Quando for positiva ela vai ficar roxa e a gran negativa vai ficar vermelha.

Quando pingamos o primeiro corante que é roxo, as bactérias irão ficar roxas e quando pingo o álcool, ele tira a cor da bactéria.
A parede celular da bactéria Gran positiva tem uma camada longa de peptídeo glicano e o álcool não vai conseguir destruir esta camada porque ela é espessa.
As bactérias Grans negativas vão ficar descoloridas, ficam brancas, perdem a cor do corante inicial.